De route start in het Olympisch Stadion, vanuit daar gaan we aan de rechterkant over de brug door naar de Burgerweeshuispad, onder de A10 door, links langs het ING House en dan gelijk rechts de Amstelveenseweg op. Hier lopen we rechtdoor tot aan de bosbaan, hier slaan we rechts af en lopen we een mooi stuk door het Amsterdamse bos. Daarna volgen we de Jachthavenweg, langs het nieuwe meer en gaan we wederom onder de A10 door riching het IJsbaanpad. De laatste kilometer lopen we rechtdoor over de brug, slaan we rechts af en finishen we de Run for Water weer in het Olympisch Stadion.
Tijdens de Run op 18 april 2010 zijn de volgende locaties afgesloten:
- Olympisch Stadion
- IJsbaanpad (Tot Sporthallen Zuid vanaf Amstelveenseweg bereikbaar. Doorgaand verkeer onder leiding van verkeersregelaars, houd rekening met vertraging)
- Fietspad van Laan der Hesperiden tot Skutsjespad (ING House) langs de museumtramlijn
- Skutsjespad (alleen bereikbaar voor ingaand verkeer vanaf Amstelveenseweg)
- Westelijke voet- en fietspad Amstelveenseweg tussen Skutsjespad en Koenenkade
- Gaffelaarspad (bereikbaar via Schokkerspad)
- Kottenspad (bereikbaar via Schokkerspad)
- Jachthavenweg westelijke rijstrook (er geldt een fileparkeerverbod vanaf 08.00)
- Jollenpad (gebied bereikbaar onder leiding van verkeersregelaars, houd rekening met vertraging)
- Boeierspad
- Damloperspad
- Tjotterspad
- Punterspad
Al deze locaties blijven begaanbaar voor hulpdiensten.